Résumé | La transfection transitoire multiplasmide est la technique la plus largement utilisée pour produire des vecteurs lentiviraux. Toutefois, les protocoles classiques de transfection transitoire, qui font appel aux cellules adhérentes 293 T et À la précipitation de l'DN par le phosphate de calcium, suivie d'une ultracentrifugation, sont fastidieux, longs et difficiles À reproduire À grande échelle. Ce chapitre d'crit un protocole simplifié de production massive et rapide de vecteurs lentiviraux et de leur purification par chromatographie d'affinité. Les particules lentivirales sont produites par transfection transitoire de cellules HEK-293 cultivées en suspension dans un milieu sans sérum en utilisant la polyéthylénimine (PEI) comme réactif de transfection. La production des vecteurs lentiviraux séeffectue dans des erlenmeyers fixés sur des agitateurs orbitaux et nécessite peu d'appareils de laboratoire supplémentaires. Il est également possible de reproduire cette méthode À plus grande échelle pour générer des volumes plus importants de stocks de vecteurs dans des bioréacteurs. La chromatographie d'affinité sur héparine permet, en une seule étape, de concentrer et de purifier de manière sélective les particules lentivirales directement À partir des surnageants de vecteurs. Cette méthode se préte À la production et À la purification de différents pseudotypes de vecteurs. |
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