DOI | Trouver le DOI : https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2010.01.008 |
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Auteur | Rechercher : Dormond, Edwige1; Rechercher : Chahal, Parminder1; Rechercher : Bernier, Alice1; Rechercher : Tran, Rosa1; Rechercher : Perrier, Michel; Rechercher : Kamen, Amine1 |
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Affiliation | - Conseil national de recherches du Canada. Institut de recherche en biotechnologie du CNRC
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Format | Texte, Article |
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Sujet | Helper-dependent adenoviral vector; Purification; Iodixanol; Ultracentrifugation; Chromatography |
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Résumé | La préparation de grandes quantités de vecteurs adénoviraux dépendants d’un virus auxiliaire purifiés est entravée par l’absence de mise au point de traitements en aval qui ont prouvé leur efficacité en matière de séparation et de récupération. Pour faciliter l’utilisation de matériel viral dépendant d’un virus auxiliaire de qualité clinique dans des études in vivo menées à grande échelle, on a mis au point un procédé de purification qui comporte trois étapes : 1) chromatographie échangeuse d’anions pour la capture initiale du virus; 2) ultracentrifugation zonale sur gradient d’iodixanol pour éliminer les virus auxiliaires de la préparation de vecteurs viraux dépendants d’un virus auxiliaire; 3) chromatographie sur gel pour éliminer l’iodixanol et les contaminants protéiques résiduels (étape d’affinage). L’étape rapide d’ultracentrifugation sur gradient d’iodixanol est très efficace pour séparer les vecteurs viraux dépendants d’un virus auxiliaire infectieux des virus auxiliaires contaminants. Le procédé global de purification donne un rendement de 80 % de particules infectieuses. En effectuant l’étape de purification à l’iodixanol deux fois, le rapport de contamination attribuable au virus auxiliaire dans la préparation de vecteurs viraux dépendants d’un virus auxiliaire est passé de 2,57 à 0,03 %, ce qui correspond à une réduction par un facteur de 85 de virus auxiliaires. On a également démontré que la chromatographie sur gel constitue une excellente façon d’éliminer l’iodixanol et d’affiner la préparation finale de vecteurs viraux dépendants d’un virus auxiliaire. |
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Date de publication | 2010-04-01 |
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Dans | |
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Langue | anglais |
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Publications évaluées par des pairs | Oui |
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Numéro NPARC | 16225326 |
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Identificateur de l’enregistrement | 9defe678-fa80-452e-a6d5-2a8094ad5593 |
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Enregistrement créé | 2010-11-05 |
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Enregistrement modifié | 2020-04-17 |
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