Résumé | AtCCD1 et AtNCED3 sont des enzymes de clivage des caroténoïdes apparentées chez Arabidopsis thaliana qui catalysent respectivement le clivage de la double liaison 9, 10 (9', 10') de substrats caroténoïdes comme la β-carotène et la double liaison 11,12 des 9-cis époxycaroténoïdes. Alors que les fonctionnalités cellulaires det de clivage de ces enzymes ont été rapportées, les mécanismes enzymatiques et les environnements structurels responsables des spécificités disparates de ces enzymes homologues ne sont pas bien caractérisés. En reliant les différences observées par absorption UV/visible et les signaux électroniques paramagnétiques du Cu(II) avec les alignements de séquence et les modèles d'homologies tridimensionnelles de deux enzymes de A. thaliana, nous avons identifié un résidu cystéine vraisemblablement proximal (Cys352) chez AtCCD1 qui n'est pas conservé chez ArNCED3. L'analyse spectrale de mutants Cys/Ala ont confirmé son caractère unique et sa proximité du site de liaison métallique, mais exclut tout rôle comme médiateur de l'affinité son au métal observée ou dans les différences de contraintes stériques associées. Des analyses plus poussées de la cinétique de clivage des substrats ont révélé une diminution du Vmax et une faible augmentation dy Km chez le mutant C352A comparativement au type sauvage, confirmant sa proximité du site catalytique et suggérant des rôles possibles de cette cystéine unique dans la modulation de l'affinité du substrat et/ou du taux de réaction de AtCCD1. |
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