Résumé | L’obtention en grande quantité d’une expression tissulaire de protéines recombinantes dans le muscle constitue un aspect important dans plusieurs applications thérapeutiques. À cette fin, nous avons produit plusieurs constructions comportant d’une à cinq copies de la séquence activatrice en amont (upstream enhancer [USE]) de 160 pb du gène humain de la troponine I spécifique au muscle squelettique à contraction lente, fusionnées au promoteur minimal de ce gène. Nous avons également étudié des constructions comportant d’une à quatre copies d’une délétion de 100 pb de USE (ΔUSE) qui entraînerait l’expression spécifique à tous les muscles chez la souris transgénique. Nous avons évalué ces constructions en mesurant l’activité du gène rapporteur β-galactosidase (β-gal). En culture cellulaire, ces amplificateurs multimères ont maintenu leur spécificité tissulaire et leur résistance transcriptionnelle a augmenté en fonction du nombre de copies. Dans les cultures de myotubes (qui contiennent encore des cellules non différenciées), les constructions comportant quatre et cinq copies de USE sont plus résistantes que la formation séquence activatrice/promoteur précoce du cytomégalovirus (CMV) et légèrement plus faibles que l’hybride composé de la séquence activatrice du CMV et du promoteur β actine (CB). Les constructions qui comportent trois USE ou quatre ΔUSE ont une résistance semblable à celle du CMV. Après un électrotransfert d’ADN plasmidique dans le muscle jambier antérieur de souris, nous avons vérifié la résistance de deux constructions (3xUSE et 3xΔUSE). D’après les mesures de l’activité de la β gal dans le lysat total du muscle et le nombre de fibres transduites, elles sont similaires au CMV et au CB. Le typage des fibres musculaires, après l’électrotransfert dans le muscle soléaire, montre que les constructions 3xUSE et 3xΔUSE sont actives dans les fibres à contraction lente et rapide. Nous avons également évalué la spécificité tissulaire de ces deux constructions par l’injection hydrodynamique des plasmides par la veine caudale. Bien que l’on ait mesuré une expression importante de la β gal dans le foie lors de l’essai du CMV, aucune expression supérieure au niveau basal n’a été détectée pour ce qui concerne les constructions 3xUSE et 3xΔUSE. La résistance, la spécificité musculaire et la petite taille de ces éléments transcriptionnels en font des candidats très intéressants pour des applications de thérapie génique. |
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